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大鼠全腦照射后腦內(nèi)一氧化氮含量的變化論文【摘要】 ［目的］觀察大鼠全腦照射后腦組織中一氧化氮（NO）含量的變化，探討放射性腦損傷中NO所起的作用。［方法］ 對(duì)SD大鼠用4MeV電子線單次全腦5Gy、15Gy和30Gy照射后，于照射后6h、1d、2d和3d檢測(cè)大鼠大腦皮層中NO的含量。［結(jié)果］5Gy、15Gy和30Gy照射后1d、2d，腦內(nèi)NO隨照射劑量遞增而增加（P 0.05），而在6h和3d各劑量組無(wú)差異。各劑量組在1d時(shí)腦內(nèi)NO達(dá)峰值，2d時(shí)逐漸下降，3d時(shí)恢復(fù)對(duì)照組水平。［結(jié)論］ 大鼠全腦照射后腦組織中NO升高液化氣報(bào)警器，它在放射性腦損傷的發(fā)病機(jī)制中可能有重要的作用。 【關(guān)鍵詞】 腦 輻射電離 一氧化氮 大鼠 輻射損傷 腦損傷 Changes on Concentration of Nitric Oxide in Brain Follo. The concentrations of NO in the brain cortex tissue supernatant easured at the 6 hour, day 1, day 2 andday 3 postirradiation.［Results］The levels of NO in the brain 1 day and 2 days postirradiation increased ight play an important role in the pathogenesis of brain radiation injury. Key l/100g體重）對(duì)大鼠進(jìn)行腹腔麻醉，用Philips SL18型加速器產(chǎn)生的能量為4MeV的電子線照射，詳細(xì)的投照與劑量確認(rèn)方法見(jiàn)前文報(bào)告3。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 各組大鼠麻醉后，用含肝素的生理鹽水（250ml左右）經(jīng)主動(dòng)脈作全身灌注一氧化氮含量，完整取腦。取大腦皮層100mg左右，按20：1加入0.1mol PBS液后充分研磨10min，將勻漿置于Eppendorf管內(nèi)，在4℃恒溫、15000r/min的條件下離心20min（德國(guó)Biofuge22 離心機(jī)），取上清液于-70℃保存。 1.3 測(cè)定指標(biāo) 將上述方法收集的大鼠大腦皮層上清液每組取6份進(jìn)行測(cè)量，依照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒的說(shuō)明進(jìn)行操作。 1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法 計(jì)算14個(gè)組的腦組織中一氧化氮的含量，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。采用方差分析，先分析同一時(shí)間點(diǎn)不同劑量之間的差別；然后再分析同一劑量下不同時(shí)間點(diǎn)之間的差別。 2 結(jié) 果 6h 與3d 時(shí)各劑量組之間大鼠腦組織中NO含量無(wú)差異。1d 時(shí)5Gy 、15Gy和30Gy組大鼠腦皮質(zhì)NO含量較對(duì)照組明顯升高（P 0.01），隨著劑量遞增腦內(nèi)NO含量增加，其中15Gy和30Gy組同5Gy組比較有明顯差異（P 0.01）一氧化氮含量，15Gy和30Gy組之間比較P 0.05。2d時(shí)15Gy和30Gy組較對(duì)照組明顯升高（P 0.01），15Gy和30Gy組較5Gy組P 0.01一氧化氮含量，而15Gy和30Gy組之間比較沒(méi)有差異（P 0.05）。

而在5Gy照射后腦內(nèi)NO含量1d時(shí)達(dá)到高峰，同其它時(shí)間點(diǎn)比較差異顯著（P 0.01）。15Gy及30Gy 照射后表現(xiàn)為同樣的結(jié)果，1d時(shí)為峰值汽油檢測(cè)儀，同其它時(shí)間點(diǎn)比較差異顯著（P 0.01），2d時(shí)逐漸下降，同1d及3d比較有顯著性差異，與6h組比較也有差異（P 0.05）。為了了解實(shí)驗(yàn)中水合氯醛腹腔麻醉對(duì)NO含量的影響，設(shè)計(jì)了麻醉但未照射的對(duì)照組，大鼠腦組織上清液中NO的含量麻醉對(duì)照組為（0.87±0.08）μmol/g，與正常對(duì)照組（0.86±0.06）μmol/g比較差異無(wú)顯著性。 3 討 論 目前已知NOS亞型有3大類，即神經(jīng)元型（nNOS）、內(nèi)皮細(xì)胞型（eNOS）和誘導(dǎo)型（iNOS），nNOS和eNOS在正常生理?xiàng)l件下即有表達(dá)，而iNOS的合成需外界刺激的作用，iNOS一旦生成即連續(xù)催化產(chǎn)生NO，而過(guò)量的NO則引發(fā)組織的某些病理生理過(guò)程的發(fā)生 4。 亞致死劑量γ射線照射小鼠后，體內(nèi)一些器官（肝、腸、肺、腎、腦、脾和心臟）NO產(chǎn)生增加。Lestaevel等5報(bào)道給予大鼠15Gy全身照射，腦內(nèi)的NO于照射后即刻升高，1 d達(dá)到高峰。用iNOS抑制劑（AMT）處理后，NO下降到平均基礎(chǔ)水平，說(shuō)明NO升高可能通過(guò)iNOS介導(dǎo)。

Clarencon等6通過(guò)腹主動(dòng)脈探測(cè)NO電信號(hào)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，γ射線15Gy照后12min增高13%，照后130min緩慢增高18%；另外，經(jīng)胸腔穿刺取血檢測(cè)NO電信號(hào)，15Gy照后90min增高17%，照后24 h增高25.6%，照后3d明顯降低。 本研究應(yīng)用硝酸還原酶法檢測(cè)大腦皮層組織上清液中NO的變化，在排除了實(shí)驗(yàn)中麻醉對(duì)含量的影響后，我們觀測(cè)到在1d、2d 兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，NO水平表現(xiàn)出劑量依賴性升高。而在5、15和30Gy照射后1d時(shí)腦內(nèi)NO達(dá)高峰，2d逐漸下降，3d恢復(fù)照射前水平。 由此看來(lái)，在大鼠大腦受到較大劑量照射后，NO在腦內(nèi)含量升高。結(jié)合大鼠在照射后，腦內(nèi)血液循環(huán)和興奮性氨基酸、炎性細(xì)胞因子等變化特點(diǎn)3，推測(cè)由于腦內(nèi)興奮性氨基酸的釋放，通過(guò)激活N甲基D天門冬氨酸（NMDA）受體，使細(xì)胞內(nèi)鈣增加，激活結(jié)構(gòu)型NOS活性，使NO生成增加7；另外，腦組織分泌白細(xì)胞介素1和腫瘤壞死因子增加，又可激活iNOS，使其表達(dá)增加，生成過(guò)量的NO8。 本實(shí)驗(yàn)研究表明，在大鼠放射性腦損傷后，腦組織內(nèi)NO水平升高。過(guò)量的NO可通過(guò)多種途徑對(duì)腦組織造成損害，引起遲發(fā)的不可逆的神經(jīng)元損傷?！?/p>

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